Abstract
P 073
Die mRNA Expression des Komplementfaktor H ist hochreguliert in proliferierenden kultivierten humanen retinalen Pigmentepithelzellen
Norbert Kociok1, Antonia Joussen2
1Labor für Exp. Ophthalmologie, Universitäts-Augenklinik Düsseldorf, 2Universitäts-Augenklinik Düsseldorf
Hintergrund
Frühe Passagen kultivierter humaner retinaler Pigmentepithelzellen (RPE) wurden als ein Modell zur Identifizierung von differentiell exprimierten Genen ohne weitere Vorbedingungen benutzt. Anschließend wurde die Gen- und Proteinexpression der identifizierten Gene in RPE-Zellen analysiert.
Methode
Wir haben eine differentielle Expressionsanalyse (DEmRNA-PCR) benutzt, um differentiell exprimierte Gene in frühen Passagen kultivierter humaner RPE-Zellen zu finden. Die entdeckte mRNA wurde mittels Sequenzierung identifiziert und ihre differentielle Expression in RPE-Zellen durch semi-quantitative RT-PCR verifiziert. Die Expression des identifizierten Proteins in vitro und in chirurgisch entfernten epiretinalen Membranen wurde durch Western blots und immunozytochemische Analysen nachgewiesen.
Ergebnisse
Mittels DEmRNA-PCR wurde eine verminderte Expression einer ca. 530 bp großen Bande in humanen RPE-Zellen der Passage 3 (P3) verglichen mit P0 entdeckt. Diese Bande wurde als Teil des humanen Komplementregulationsfaktors H identifiziert, einem Kofaktor des Komplementfaktors I. Die mRNA Expression beider Regulationsproteine des Komplementsystems wurde in frisch präparierten humanen RPE-Zellen und in kultivierten Zellen der Passage 0 bis Passage 8 durch semi-quantitative genspezifische RT-PCR nachgewiesen. Die Expression beider Proteine in kultivierten RPE-Zellen wurde mittels Western blotting verifiziert. Der Nachweis beider Proteine in chirurgisch entfernten epiretinalen Membranen gelang mittels Immunohistochemie.
Schlussfolgerungen
Mit dem Nachweis der differentiellen Expression der Regulationsfaktoren H und I des Komplementsystems in kultivierten RPE-Zellen durch eine Technik ohne Vorbedingungen haben wir die Bedeutung dieser Faktoren in RPE-Zellen demonstriert. Unsere Ergebnisse weisen auf eine möglicherweise ebenso große Bedeutung des Komplementsystems in der proliferativen Retinopathie hin wie sie bei der altersbedingten Makuladegeneration schon nachgewiesen ist.
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