Abstract
P 077
Regulation des Pigmentepithel-assoziierten Faktors PEDF in retinalen Glia-(Müller-)Zellen
XiuMei Yang1, Wolfram Eichler1, Andreas Reichenbach2, Peter Wiedemann1
1Klinik und Poliklinik für Augenheilkunde, Universitätsklinikum Leipzig, Leipzig; 2Paul-Flechsig-Institut für Hirnforschung, Universität Leipzig A.ö.R., Leipzig
Zielstellung:
Der Pigmentepithel-assoziierte Faktor PEDF, ein Glykoprotein mit pleiotropen Funktionen, kommt natürlicherweise im Auge vor und gilt als entscheidend bei der Inhibition der pathologischen Angiogenese. Da retinale Glia- (Müller-) Zellen PEDF produzieren, waren wir bestrebt, die Regulation der PEDF-Produktion zu untersuchen, wobei besonders ischämisch-hypoxische Bedingungen von Interesse waren.
Methoden:
PEDF wurde in primären kultivierten Meerschweinchen- und Ratten-Müllerzellen analysiert, die gegenüber dem Proteinsynthese-Inhibitor Zykloheximid (CHX), dem Transkriptions-Inhibitor Aktinomyzin D (Act D), dem selektiven Proteasom-Inhibitor MG132 und einem Inhibitor des Hypoxie-induzierbaren Faktors (HIF)-1 exponiert wurden. Eine Suppression der HIF-1-alpha-Expression durch RNA-Interferenz (RNAi) wurde genutzt, um den Einfluss von HIF-1 alpha auf die PEDF-Expression zu studieren. Ausserdem kamen semi-quantitative Realtime-PCR, ELISA und Western-Blotting zum Einsatz, um PEDF-Produktion und Sekretion zu analysieren.
Ergebnisse:
Eine Behandlung von Müllerzellen durch CHX, Act D und MG132 führte – sowohl unter Normoxie als auch Hypoxie – zu einem Anstieg von PEDF auf mRNA- und Protein-Niveau. Die Anwesenheit von HIF-1-Inhibitor oder HIF-1-alpha-siRNA resultierte in einer Hochregulation der PEDF-mRNA-Expression, verbunden mit einem Rückgang der PEDF-Sekretion. Parallel war eine Hochregulation des Vaskulären Endothelialen Wachstumsfaktors (VEGF) unter Hypoxie zu verzeichnen, dessen Freisetzung sowohl durch CHX und Act D als auch durch den HIF-1- Inhibitor – bei in Parallelkulturen zu beobachtender Hochregulation durch MG 132 – unterdrückt wurde.
Schlussfolgerungen:
Die Ergebnisse legen nahe, dass die PEDF-Produktion durch Müllerzellen weitestgehend posttranskriptional reguliert wird. HIF-1 alpha, ein Hauptregulator der VEGF-Expression, scheint an der Kontrolle des PEDF-Niveaus in Müllerzellen beteiligt zu sein.
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