Abstract
P 079
Cy5-konjugiertes Macugen als ein neues Mittel für die histologische Untersuchung des VEGF165-Proteins in CNV-Membranen
Aysegül Tura1, Sigrid Henke-Fahle2, Olcay Tatar3, Julia Beutel1, Matthias Lüke1, Salvatore Grisanti1
1Universitäts-Augenklinik, Campus Lübeck, Universitätsklinikum Schleswig-Holstein, Lübeck, 2Breuninger Labor, Universitäts-Augenklinik Tübingen, 3Universitäts-Augenklinik Tübingen
Hintergrund
Choroidale Neovaskularisation (CNV) ist der Hauptgrund des starken Sehverlusts in der feuchten Form der altersbedingten Makuladegeneration (AMD). Trotz zahlreichen experimentellen und klinischen Beweisen die eine entsprechende Rolle auf die 165aa-VEGF-Isoform (VEGF165) in der Pathogenese der CNV zurückführen, ist die histologische Verteilung dieser Isoform in den CNV-Membranen noch unbekannt. Aufgrund des Fehlens spezifischer Antikörpern gegen VEGF165 ist die Entwicklung neuer Strategien erforderlich um diese Isoform histologisch nachzuweisen. In dieser Arbeit wurde Cy5-konjugiertes Macugen (M-Cy5) angewendet um die Expression des VEGF165-Proteins in CNV-Membranen zu untersuchen.
Methode
Die CNV-Membranen wurden aus drei AMD-Patienten chirurgisch entfernt und ohne Fixierung eingefroren. Immunhistochemie wurde auf serialen Kryoschnitten von den Membranen durchgeführt um das Ausmaß der Endothelzellaktivierung sowie die VEGF-Expression nachzuweisen. Die Inkubation mit dem M-Cy5 erfolgte auf Schnitten neben den Bereichen mit starker VEGF-Färbung. Um die Signale von der M-Cy5 Färbung zu verstärken wurden zusätzliche Kryoschnitte anschließend mit biotin-konjugierten anti-Cy5 Antikörpern und Alexa 488-Streptavidin weiterinkubiert und mittels Fluoreszenzmikroskop analysiert.
Ergebnisse
Die VEGF-Expression wurde sowohl in den Bereichen mit aktiver Noevaskularisation als auch in den umliegenden Stromazellen detektiert. Die M-Cy5 Färbung lokalisierte zu den Bereichen mit ausgeprägter VEGF-Immunreaktivität insbesondere um die aktivierten Endothelzellen herum.
Schlussfolgerungen
Das hohe Ausmaß der Überlappung in dem Signalprofil der M-Cy5 Färbung und der VEGF-Immunfärbung weist darauf hin, dass die 165aa-Isoform eine erhebliche Portion des VEGF-Proteins in den CNV-Membranen darstellt. Ferner betonen diese Ergebnisse das Potential des Cy5-konjugierten Macugens als ein wertvolles Mittel für die histologische Untersuchung der VEGF165-Isoform.
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