Abstract

P 145

Die Rolle von Relaxin 2 und Insulin-like Factor 3 an der Augenoberfläche

Ulrike Hampel1, Thomas Klonisch2, Friedrich Paulsen1
1Institut für Anatomie und Zellbiologie, Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg, Halle/Saale, 2Department of Human Anatomy and Cell Science, University of Manitoba, Winnipeg, Manitoba, Kanada

Hintergrund
Die Hormone Relaxin 2 (RLN2) und Insulin-like Factor (INSL3) sind vor allem für ihre Funktion im Reproduktionstrakt bekannt. Durch ihren Einfluss auf Matrixmetalloproteinasen (MMPs) und Tissue Inhibitors of Matrix Metalloproteinases (TIMPs) beeinflussen sie die extrazelluäre Matrix. Das Trockene Auge ist mit einer chronischen Entzündung und Umbauvorgängen der Augenoberfläche assoziert, bei denen MMPs und TIMPs eine große Rolle spielen. In unseren Untersuchungen konnten wir RLN2 und INSL3 sowie die Rezeptoren LGR7 und LGR8 in einer Hornhautepithelzelllinie (Araki-Sasaki, HCE), einer Konjunktivaepithelzelllinie (IOBA-NHC, HCjE) und in einer Sebozytenzelllinie (SZ95, SC) nachweisen. Ziel der jetzigen Untersuchungen ist die Analyse der Effekte von RLN2 und INSL3 auf Zellproliferation, -migration sowie Expression von MMPs und TIMPs in den Zelllinien.
Methode
Für den Proliferationsassay werden Zellen für 24h mit unterschiedlichen RLN2- und INSL3-Konzentrationen stimuliert. Mit Hilfe eines Scratch Assays wird das Migrationsverhalten von HCE und HCjE Zellen nach 24h Stimulation mit RLN2 und INSL3 untersucht. Real-time PCR Analysen dienen dazu, den Einfluss von RLN2 und INSL3 auf die Expression von MMPs und TIMPs zu untersuchen.
Ergebnisse
RLN2 und INSL3 stimulieren die Proliferation in HCE, HCjE und SC Zellen. Keinen Effekt hat die Stimulation mit RLN2 und INSL3 auf die Proliferation von primären kornealen Fibroblasten. Die Migration von HCE und HCjE Zellen wird durch 24h Stimulation mit RLN2 und INSL3 signifikant gesteigert. Nach 24h Inkubation mit RLN2 und INSL3 steigt das mRNA Expressionslevel von MMP2 in HCE, HCjE und SC Zellen signifikant an. In HCE und SC Zellen wird die mRNA Konzentration von TIMP1 erhöht, in HCjE herab reguliert. Das TIMP1 mRNA Expressionlevel steigt in HCjE und SC Zellen nach Stimulation, nimmt hingegen aber in HCE Zellen ab. Die TIMP2 mRNA Expression wird in HCjE und SC Zellen signifikant gesteigert, auf HCE Zellen haben die Hormone keinen Einfluss. Die mRNA Konzentration von MMP9 und MMP13 wird durch RLN2 und INSL3 in allen 3 Zelllinien nicht beeinflusst.
Schlussfolgerungen
RLN2 und INSL3 erhöhen unter Kulturbedingungen die Proliferation und Migration von HCE, HCjE und SC Zellen. Außerdem beeinflussen sie die Expression von MMP2, TIMP1 und TIMP2. Offen bleibt die Frage, ob diese Effekte auch in vivo auftreten.

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