Abstract

P 151

Trefoil Factor Family-Peptid 3 (TFF3) hat Einfluss auf die Expression von Tight junction-Proteinen in einem kornealen in-vitro-Scratchmodell

Ute Schulze1, Laura Contreras-Ruiz2, Yolanda Diebold2, Friedrich Paulsen1
1Institut für Anatomie und Zellbiologie, Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg, Halle/Saale, 2Ocular Surface Group, IOBA University of Valladolid, Valladolid, Spain

Hintergrund
Benachbarte Epithelzellen sind durch Tight junctions (Verschlusskontakte) verbunden. Dabei handelt es sich um Proteinkomplexe, die aus verschiedenen Transmembranproteinen, wie Occludin, Claudin 1 und 2, sowie den zytoplasmatischen Plaqueproteinen Zonula occludens ZO-1 und ZO-2 bestehen. Trefoil Factor Family Peptid 3 (TFF3) ist ein Muzin-assoziiertes Molekül, das in der Hornhaut nach Verletzungen induziert wird, eine Rolle für die Viskosität des Tränenfilms spielt und wundheilungsfördernde und antiapoptotische Eigenschaften besitzt. Im vorliegenden Projekt haben wir den Einfluss von TFF3 auf verschiedene Tight junction Proteine untersucht, um die durch TFF3 vermittelten wundheilungsfördernden Eigenschaften an der Augenoberfläche besser zu verstehen.
Methode
Die Expression ausgewählter Proteine des Tight Junction-Komplexes wurde mittels RT-PCR in der humanen SV40-immortalisierten Korneaepithelzelllinie (Araki-Sasaki HCE-Zelllinie) untersucht. Die Zellen wurden zwei verschiedenen Bedingungen ausgesetzt (mit und ohne Verletzungen der Zellschicht – als definiertes Verletzungssimulationsmodell) und jeweils für 5min, 1h, 6h und 24h mit rekombinantem humanen TFF3 (rhTFF3, 0,3mg/ml) stimuliert. Im Anschluss wurde die Expression der Tight Junction-Proteine mittels Realtime-PCR untersucht. Immunfluoreszenzuntersuchungen werden z.Z. noch durchgeführt.
Ergebnisse
Alle untersuchten Vertreter des Tight Junction-Proteinkomplexes lassen sich auf einem Basislevel in HCE-Zellen nachweisen. Nach Stimulation mit rhTFF3 zeigen die Transmembranproteine Occludin, Claudin 1 und  Claudin 2 ein signifikant erhöhtes Expressionsniveau auf mRNA-Ebene. Die Claudin 1 mRNA Expression ist nach Stimulation mit rhTFF3 für 6h hochreguliert; die Occludin mRNA Expression ist nach 6h und nach 24h gesteigert. Das Claudin 2-mRNA-Level wird bereits nach Stimulation für 1h bis zu 24h induziert. Im Gegensatz dazu zeigt das zytoplasmatische Plaqueprotein ZO-1 lediglich nach 24h vermehrte Expression, die ZO-2 mRNA Expression ist nach 24h vermindert. Die mRNA-Level aller untersuchten Proteine des Tight Junction-Komplexes zeigen nach Verletzung (Scratchmodell) im Vergleich zur nicht verletzten Kontrolle zu allen untersuchten Stimulationszeitpunkten mit rhTFF3 einen signifikanten Anstieg.
Schlussfolgerungen
TFF3 scheint bei der Regulation der Barrierefunktion eine Rolle zu spielen. Dies deutet auf eine Funktion im Rahmen der Wiederherstellung der Oberflächenintegrität (Restitution) hin.

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